Kemična sestava iz nerjavečega jekla 347. Obseg venske ali kapilarne krvi, specifične za SARS-CoV-2, T-celični odzivi določajo imunost na COVID-19.

Hvala, ker ste obiskali Nature.com.Uporabljate različico brskalnika z omejeno podporo za CSS.Za najboljšo izkušnjo priporočamo, da uporabite posodobljen brskalnik (ali onemogočite način združljivosti v Internet Explorerju).Poleg tega, da zagotovimo stalno podporo, spletno mesto prikažemo brez slogov in JavaScripta.
Drsniki, ki prikazujejo tri članke na diapozitiv.Uporabite gumba za nazaj in naprej, da se premikate po diapozitivih, ali pa gumbe za krmiljenje diapozitivov na koncu, da se premikate po vsakem diapozitivu.

Kemična sestava nerjavečega jekla 347

Kemična sestava tuljave cevi iz nerjavečega jekla 347

Kemična sestava in mehanske lastnosti tuljave iz nerjavečega jekla 347 so naslednje:
- Ogljik – 0,030 % max
- krom - 17-19%
- Nikelj - 8-10,5%
- Mangan – največ 1 %

Mehanske lastnosti tuljave iz nerjavečega jekla 347

Po navedbah proizvajalca cevi iz nerjavečega jekla 347, mehanske lastnosti cevi 347:
- Natezna trdnost (psi) – 75.000 min
- Meja tečenja (psi) – 30.000 min
- Raztezek (% v 2″) – 25% min
- Brinellova trdota (BHN) – 170 max

Uporaba in uporaba cevi iz nerjavečega jekla 347

• Tuljava iz nerjavečega jekla 347, ki se uporablja v tovarnah sladkorja.
• Tuljava iz nerjavečega jekla 347, ki se uporablja v gnojilih.
• Tuljava iz nerjavečega jekla 347, ki se uporablja v industriji.
• Tuljava iz nerjavečega jekla 347, ki se uporablja v elektrarnah.
• Tuljava iz nerjavečega jekla 347, ki se uporablja v hrani in mlečnih izdelkih.
• Tuljava iz nerjavečega jekla 347, ki se uporablja v tovarni nafte in plina.
• Proizvajalec cevi iz nerjavečega jekla 347, ki se uporablja v ladjedelništvu.

T-celice, specifične za SARS-CoV-2, naj bi ščitile pred okužbo in napredovanjem COVID-19, vendar za to ni neposrednih dokazov.Tukaj smo primerjali meritve polne krvi specifičnih za SARS-CoV-2 interferon-γ pozitivnih T-celic s pozitivnimi rezultati diagnostičnega testa COVID-19 (PCR in/ali lateralni tok) v 6 mesecih po Lianinem odvzemu krvi.Med 148 udeleženci, ki so darovali vzorce venske krvi, je bila velikost T-celičnega odziva, specifičnega za SARS-CoV-2, bistveno večja pri tistih, ki so ostali zaščiteni, kot pri tistih, ki so bili okuženi (P < 0,0001).% tveganja okužbe, medtem ko je visoka intenzivnost to tveganje zmanjšala na 5,4 %.Ti rezultati so bili posplošeni na dodatnih 299 udeležencev, ki so testirali razširljiv test kapilarne krvi, ki bi lahko olajšal dostop do podatkov o imunosti T-celic na populacijskem merilu (14,9 % proti 4,4 %).Tako lahko meritev celic T, specifičnih za SARS-CoV-2, napove tveganje za okužbo in jo je treba ovrednotiti pri spremljanju imunskega statusa posameznika in populacije.
Merjenje in razumevanje imunskega odziva na okužbo s SARS-CoV-2 je pomembno za razvoj učinkovitih prihodnjih strategij za zmanjšanje javnozdravstvenih in gospodarskih vplivov prihodnjih izbruhov COVID-19.Identifikacija imunskih korelatov bo zagotovila pomembne informacije o dovzetnosti prebivalstva za virusne okužbe, po možnosti zgodnje opozorilo o največjih hospitalizacijah, poleg tega pa bo ljudem omogočila, da osebno upravljajo svoje tveganje za okužbo in tveganje za okužbo drugih.Imunski nadzor se je izkazal za ključnega pomena za oceno učinkovitosti cepiv proti covidu-19 pri zdravih bolnikih in bolnikih z visokim tveganjem1,2,3, zlasti pri mutantih SARS-CoV-24, odkrivanje imunsko oslabelih pa bo pomenilo potrebo po krepitvi imunosti. Cepite se in preprečite prihodnji izbruhi.
Posameznikova stopnja imunosti na okužbo s SARS-CoV-2 je odvisna od več dejavnikov: virusne obremenitve v času izpostavljenosti, različic virusa, starosti, prejšnjega cepljenja/okuženega statusa, sočasnih bolezni, zdravil in, kar je najpomembnejše, okužbe s SARS-CoV. .2 adaptivni imunski odziv se pojavi v času izpostavljenosti virusu5.Vrednotenje imunskega odziva na okužbo s SARS-CoV-2 in/ali cepljenje je bilo osredotočeno na serološke teste, ki merijo prisotnost protiteles, specifičnih za strukturni protein (npr. spike glikoprotein).Vendar samo prisotnost ali odsotnost protiteles ne določa natančno zaščitnega imunskega odziva, saj so odzivi sčasoma znatno oslabljeni6 in nevtralizacija različic SARS-CoV-2 pri prebolelih ali dvakrat cepljenih posameznikih Šibka aktivnost, ki bi lahko povzročila veliko število vdornih okužb7.Dejansko se je zaščita pred simptomatskim COVID-19, ki ga povzroča različica Omicron (B.1.1.529), zmanjšala na približno 10 % po samo 4–6 mesecih cepljenja z mRNA, čeprav je zaščita pred hudo boleznijo vztrajala >68 % vsaj 7 mesecev8.Merjenje odzivov celic adaptivnega spomina T, ki zagotavljajo dolgoročno zaščito pred virusno okužbo, je najboljši pokazatelj dovzetnosti za okužbo s SARS-CoV-2 in zato boljši pokazatelj tveganja pozitivnega testa za COVID-199, saj je specifični T celice lahko preprečijo okužbo.brez serokonverzije10,11.Vendar je bilo merjenju odzivov celic T namenjeno manj pozornosti zaradi metodoloških težav in logističnih težav pri pridobivanju in transportu vzorcev venske krvi, zlasti pri izvajanju velikih opazovalnih študij za oceno učinkovitosti cepiva in spremljanje imunosti.Vendar pa cepljeni posamezniki kažejo močno aktivnost celic T proti različicam SARS-CoV-2, kar lahko izravna izgubo reaktivnosti protiteles in omeji resnost COVID-1912,13.
Tu smo skušali razumeti, ali lahko ena sama meritev odziva celic T SARS-CoV-2 napove absolutno tveganje za okužbo s SARS-CoV-2 v 6 mesecih po vzorčenju krvi, ne glede na predhodne dejavnike, ki vplivajo na imunski sistem.Da bi bil test celic T visoko zmogljiv in uporaben v večjih študijah, smo poskusili narediti tudi miniaturiziran test, tako da ga je mogoče izvajati s kapilarnim vzorcem krvi iz prsta.
Izmerili smo celični in humoralni imunski odziv pri zdravih darovalcih s kombiniranim odkrivanjem celic T SARS-CoV-2 in protiteles IgG na podlagi polne venske krvi (za značilnosti udeležencev glejte marec 2022 14. Pri cepljenih darovalcih je SARS-CoV-2- specifični T-celični odzivi so bili določeni z merjenjem ravni interferona-γ (IFN-γ) v plazmi po stimulaciji polne krvi s peptidom SARS-CoV-2 (kot prej, ref. 14,15,16,17,18) in povezanimi odzivi IgG z nukleokapsidom (N) so bili povečani pri tistih, ki so poročali o prejšnji okužbi, čeprav sta bila oba odziva višja pri predhodno okuženih necepljenih darovalcih, največja v telesu (slika 1a, b). so bili najvišji pri predhodno okuženih cepljenih darovalcih (slika 1c–e).
specifični odzivi celic IFN-γ+ T za SARS-CoV-2 so bili izmerjeni s testom venske polne krvi in ​​so temeljili na cepljenju udeležencev in predhodnem statusu okužbe s SARS-CoV-2 (potrjeno s PCR in/ali testom lateralnega pretoka)' Vac + /Inf +' n = 60 (zeleno), 'Vac + /Inf-' n = 82 (modro), 'Vac-/Inf +' n = 4 (rumeno), 'Vac-/Inf-' n = 1 (ni uporabljeno).Reakcije vezave IgG, specifične za SARS-CoV-2, ciljajo na nukleokapsid (»N«) (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), domeno za vezavo receptorja (»RBD«) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), podenota 1 (»S1«) (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ proti Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ v primerjavi z Vac+/Inf-) P = 0,012) in vrh podenote 2 (»S2«) (e) je bil izmerjen s preiskavami venske polne krvi in ​​na podlagi cepljenja udeležencev in predhodnega SARS -CoV-2 (potrjeno s PCR in/ ali test lateralnega pretoka) nalezljivo stanje.'Vac + /Inf +' n = 60 (zelena), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (modra), 'Vac-/Inf +' n = 4 (rumena).Primerjave so bile narejene s Kruskal-Wallisovim testom, prilagojenim za več primerjav z Dunnovim testom.Podatki so prikazani kot grafikoni (sredinska črta na mediani, zgornja meja na 75. percentilu, spodnja meja na 25. percentilu) z brki na najnižji in največji vrednosti.Vsaka pika predstavlja darovalca.Neobdelani podatki so na voljo v obliki neobdelanih podatkovnih datotek.
Po odvzemu krvi so bili udeleženci naprošeni, naj sami poročajo o pozitivnih rezultatih PCR in/ali testa bočnega pretoka za COVID-19;če so bili udeleženci med 1. septembrom 2021 in 29. decembrom 2021 pozitivni na testiranju, so za javno zdravje Wales po 29. decembru 2021, ko ta možnost skrbi postane prevladujoča.Med 148 darovalci, ki jih je bilo mogoče oceniti, smo opazili stopnjo okužbe 26,3 % (39/148) v 6 mesecih po darovanju krvi, od katerih jih je 38 prejelo drugi ali tretji odmerek cepiva proti COVID-19 (do preboja okužbe je prišlo po Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) cepivo mRNA ali cepivo AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));okužen je bil tudi necepljeni darovalec.Obseg za SARS-CoV-2 specifičnih IFN-γ-pozitivnih T-celičnih odzivov je bil znatno nižji pri tistih, ki so poročali o pozitivnem diagnostičnem testu za COVID-19, kot pri neokuženih darovalcih (P < 0,0001; slika 2a), predvsem zaradi optimalna indukcija odzivov T celic s cepljenjem pri nekaterih udeležencih (P = 0,050; dopolnilna slika 1).Med obsegom odziva T celic IFN-γ+ in časom do pozitivnega rezultata testa na COVID-19 ni bilo korelacije (dodatna slika 2).V nasprotju s tem niti odzivi IgG, ki vežejo RBD-, S1-, S2 (slike 2b–d), niti odzivi protiteles, ki nevtralizirajo RBD-, S1, niso bili specifični za divji tip ali delta SARS-CoV-2 (B.1.617).) (dodatna slika 3) lahko razlikuje med ljudmi, ki jim grozi okužba.Vendar so bili nizki odzivi IgG, vezani na N, proti SARS-CoV-2 povezani s tveganjem okužbe s COVID-19 (P = 0,0084; slika 2e);tisti, ki so bili pozitivni na testu, so bili 85 % manj verjetni (P = 0,00035; OR 0,15, 95).% IZ: 0,047–0,39 (dodatna slika 4).
V vzorcih venske krvi zdravih darovalcev (n = 148) so ocenili za SARS-CoV-2 specifične odzive T-celic IFN-γ+ (a; ****P < 0,0001) in vezavo receptorja Spike na specifični SARS-CoV -2 dražljaj.domena (»RBD«) (b), podenota konice 1 (»S1«) (c), podenota konice 2 (»S2«) (d) in nukleokapsida (»N«) (e; **P = 0,0084 ) .Identificirani udeleženci, ki so bili pozitivni na COVID-19 (PCR in/ali bočni tok);vse okužbe so se pojavile v 6 mesecih po odvzemu krvi.Primerjave so bile narejene z uporabo dvostranskega Mann-Whitneyjevega testa.Podatki so prikazani kot grafikoni (sredinska črta na mediani, zgornja meja na 75. percentilu, spodnja meja na 25. percentilu) z brki na najnižji in največji vrednosti.Vsaka pika predstavlja darovalca.ns ni pomemben.Toplotni zemljevid f prikazuje korelacije Spearmanovega ranga med spremenljivkami za navedeni nabor podatkov.Primerjave, ki niso bile statistično značilne, so bile izključene iz matrike in označene s praznimi celicami.Neobdelani podatki so na voljo v obliki neobdelanih podatkovnih datotek.
Prednastavljena diagnostična pozitivna meja 14 se je zdela preveč poljubna za oceno tveganja ponovne okužbe, zato so bili določeni interkvartilni razponi za določitev parametrov absolutnega tveganja.Statistični model, ki je vključeval samo spremenljivke, ki so pomembno vplivale na rezultate, je pokazal, da je bila velikost odziva T celic IFN-γ+, specifičnega za SARS-CoV-2, najpomembnejši imunski biomarker za določanje posameznikovih možnosti, da bo testiran na COVID.-19 pozitivno (slika 2f in dopolnilna slika 4).Bolniki s specifičnim odzivom T celic IFN-γ+ za SARS-CoV-2 v tretjem (194–489 pg/ml IFN-γ) in četrtem (>489 pg/ml IFN-γ) kvartilu 65 % (P = 0,055; OR 0,35, 95 % IZ: 0,11–1,00) in 90 % (P = 0,0050; OR 0,098, 95 % IZ: 0,014–0,42) je imelo več udeležencev.Možnosti so majhne (dopolnilna slika 4).Na splošno so imeli udeleženci s specifičnim T-celičnim odzivom SARS-CoV-2 iz venske krvi ≤79 pg/mL IFN-γ 43,2-odstotno tveganje za preboj okužbe po 6 mesecih v primerjavi z odzivom >489 pg/mL.ml IFN-γ je imelo tveganje za okužbo 5,4 % (tabela 2).
Obseg testiranja polne venske krvi je omejen zaradi potrebe po odvzemu vzorca s strani flebotomista.Da bi povečali razpoložljivost testiranja celic T in IgG za SARS-CoV-2, je bila razvita alternativna metoda kapilarnega vzorčenja krvi, ki udeležencem omogoča, da vzorce krvi iz prstnih paličic dobijo doma.Kolikor nam je znano, ni bilo predhodnih poročil o merjenju za antigen specifične funkcije T celic v vzorcih kapilarne krvi.Prej je bila dokazana močna korelacija med številom limfocitov, pridobljenim z uporabo primerljivih vzorcev kapilarne in venske krvi.Poleg tega so poročali, da testi na osnovi polne krvi, ki merijo T-celične odzive, specifične za SARS-CoV-2, uporabljajo le 320 μL venske krvi,20 kar odpravlja pomisleke glede pogostosti progenitorskih T-celic v vzorcih kapilarne krvi.
Uporabili smo ta visoko zmogljiv standardiziran kolaborativni test celic T SARS-CoV-2 in protiteles IgG na podlagi kapilarne polne krvi za merjenje celičnega in humoralnega imunskega odziva pri udeležencih z različnimi komorbidnostmi in statusom predhodnega cepljenja/okužbe (tabela 1).zbrani iz celega Združenega kraljestva med 24. januarjem in 14. marcem 202214. Večina (90,9 %) vzorcev prstov je bila pravilno pridobljenih in poslanih v laboratorij v 24 urah po odvzemu.V nekaterih primerih so bili vzorci prejeti v 48 urah po odvzemu krvi, vendar nobeden od teh vzorcev ni prestal preverjanja kontrole kakovosti in ni vplival na splošne meritve celic T ali protiteles (dodatna slika 5).Čeprav so bile pri nekaterih posameznikih razlike v velikosti odziva T-celic IFN-γ+, specifičnega za SARS-CoV-2, izmerjenega v ustreznih vzorcih kapilarne in venske krvi, na splošno ni bilo pomembnih razlik (P = 0,88; dopolnilna slika 6 ).).
Za SARS-CoV-2 specifični IFN-γ+ T-celični odzivi so bili znatno povečani pri cepljenih posameznikih, ki so poročali tudi o prejšnji okužbi (P = 0,0001), vendar ne bistveno višje kot pri predhodno okuženih necepljenih posameznikih darovalcih (P = 0,19, sl. 3a).).Odzivi IgG proti spike glikoproteinu (RBD, S1, S2) so bili znatno višji pri cepljenih darovalcih kot pri necepljenih darovalcih, ne glede na predhodno stanje okužbe (slika 3b-d).Zanimivo je, da je bil povprečni odziv IgG, vezanega na N, najvišji pri predhodno okuženih necepljenih udeležencih v primerjavi s cepljenimi udeleženci, čeprav to ni doseglo pomembnosti (slika 3e).Med necepljenimi in neokuženimi darovalci, ki so se sami prijavili, je bilo 15 od 37 (40,5 %) udeležencev pozitivnih na N-vezan IgG, nad predhodno določenim pragom 2,0 BAU/mL14;teh 15 udeležencev. Dvanajst od teh bolnikov je bilo pozitivnih na IFN-γ+ T-celični odziv nad predhodno določenim pragom 22,7 pg/mL IFN-γ14.Zato je verjetno, da so bili ti udeleženci predhodno okuženi s SARS-CoV-2 in niso bili testirani na COVID-19 zaradi osebne izbire, pomanjkanja opreme za PCR in/ali lateralnega pretoka ali pa so bili asimptomatski.Čeprav je obstajala pomembna korelacija med odzivi celic T na IFN-γ+ in nivoji IgG, povezanih z N, pri necepljenih darovalcih (P = 0,0044; dodatna slika, se je odziv IgG, vezan na N, zmanjšal hitreje kot odziv IgG, vezan na N, medtem ko je IFN-γ + Odzivi celic T so se ohranili ne glede na status cepljenja, čeprav je bilo število darovalcev 50 tednov po izzivu nizko (dodatna slika 8). Vrsta cepljenja se je na splošno malo razlikovala pri opaženih odzivih IgG, specifičnih za SARS-CoV-2, T celice in povezane z RBD, čeprav so udeleženci, ki so prejeli dva odmerka BNT162b2, čemur je sledilo ponovno cepljenje z mRNA1273, pokazali bistveno višje ravni celic IFN-γ + T bolj občutljive na SARS-CoV-2 kot tisti, ki so prejeli dva odmerka ChAdOx1 in BNT162b2 (dodatno Slika 9) Poleg tega so poročane sočasne bolezni imele malo splošne razlike v opazovanih T-celičnih odzivih v primerjavi z zdravimi darovalci (dopolnilna slika 10).
odzive T celic IFN-γ+, specifične za SARS-CoV-2, so izmerili s kapilarnim testom polne krvi in ​​so temeljili na cepljenju udeležencev in predhodnem statusu okužbe s SARS-CoV-2 (potrjeno s PCR in/ali testom lateralnega pretoka).'Vac + /Inf +' n = 42 (zelena), 'Vac + /Inf-' n = 158 (modra), 'Vac-/Inf +' n = 33 (rumena), 'Vac- /Inf-' n = 37 (siva).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- v primerjavi z Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ v primerjavi z Vac- /Inf-) P = 0,014 .SARS-CoV-2 specifične reakcije vezave IgG na spike receptor binding domain ("RBD") (b; ****P < 0,0001, ns: ni pomembno), spike podenota 1 ("S1") (c; * * **P < 0,0001, ns: ni pomembno), podenota 2 ("S2") (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) in nukleokapsida ("N") (e; ****P < 0,0001, ns ni pomembno) so bile izmerjene z analizo polne venske krvi in ​​na podlagi cepljenja udeležencev in predhodnega SARS-CoV-2 (potrjeno s PCR in/ali analizo lateralnega pretoka). Okužbe so bile razdeljene na stanje.'Vac + /Inf +' n = 46 (zeleno), 'Vac + /Inf-' n = 182 (modro), 'Vac-/Inf +' n = 34 (rumeno), 'Vac-/Inf-' n = 37 (siva).Primerjave so bile narejene s Kruskal-Wallisovim testom, prilagojenim za več primerjav z Dunnovim testom.Podatki so prikazani kot grafikoni (sredinska črta na mediani, zgornja meja na 75. percentilu, spodnja meja na 25. percentilu) z brki na najnižji in največji vrednosti.Vsaka pika predstavlja darovalca.Neobdelani podatki so na voljo v obliki neobdelanih podatkovnih datotek.
Kot prej so bili udeleženci naprošeni, da poročajo o pozitivnih rezultatih PCR in/ali stranskega pretoka krvi za COVID-19;po podatkih zdravstvene agencije Združenega kraljestva so bili udeleženci v času testiranja pozitivne različice virusa domnevno okuženi s koronavirusom Omicron (B.1.1.529), saj je bila to prevladujoča različica v Združenem kraljestvu v študijskem obdobju.Med 299 darovalci, ki jih je bilo mogoče oceniti, smo v treh mesecih po kapilarnem darovanju opazili stopnjo okužbe 8,0 % (24/299), od katerih jih sedem ni bilo cepljenih.Delež spremljajočih bolezni med vsemi udeleženci je bil manjši pri tistih s pozitivnim testom na COVID-19 (10,7 %) kot pri tistih z negativnim testom na COVID-19 (24,4 %, tabela 1), kar je lahko posledica dejstva, da so udeleženci z določenimi bolezni so bolj previdni in varujejo pred možnimi posledicami, kot sta sladkorna bolezen in rak.Kot so opazili v kohorti venske krvi, so za SARS-CoV-2 specifične interferon-γ (IFN-γ) pozitivne celice T, izmerjene v vzorcih kapilarne krvi posameznikov, ki so poročali o pozitivnem diagnostičnem testu za COVID-19.Velikost odziva je bila znatno nižja kot pri neokuženih darovalcih (P = 0,034; slika 4a) zaradi relativno slabe indukcije T-celičnega odziva s cepljenjem in/ali predhodno okužbo (dodatna slika 11).Podobno niti odzivi IgG, ki vežejo RBD-, S1-, S2 (slike 4b–d), niti odzivi protiteles, ki nevtralizirajo RBD-, S1, niso bili specifični za divji tip ali delta SARS-CoV-2 (B. 1.617).(Dodatna slika 12).Identificirati je mogoče posameznike, pri katerih obstaja veliko tveganje za okužbo.V nasprotju z vensko kohorto tudi odzivi IgG, povezani z N, ne razlikujejo med tveganjem za COVID-19 (slika 4e), kar kaže na to, da različica Omicron (B.1.1.529) poveča imunsko utajo pri predhodno okuženih posameznikih, kot je bilo nedavno opisano 21. Nasprotno pa je bila moč specifičnega SARS-CoV-2 T-celičnega odziva IFN-γ ponovno najpomembnejša spremenljivka pri določanju individualnih možnosti pozitivnega testa na COVID-19 (slika 4f).Na splošno so imeli udeleženci z odzivom kapilarnih T-celic, specifičnim za SARS-CoV-2 ≤23,7 pg/mL IFN-γ, 14,9-odstotno tveganje za okužbo po treh mesecih v primerjavi z odzivom >141,6 pg/mL.ml IFN.-γ je imelo tveganje za okužbo 4,4 % (tabela 2).
IFN-γ+ T-celični odzivi, specifični za SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) in SARS-CoV-2 specifično IgG-targetirano receptorsko vezavno domeno (»RBD«) (b), spike podenota 1 (' S1′) (c), spike podenota 2 ('S2') (d) in reakcija vezave nukleokapsida ('N') (e).Udeleženci, ki so bili identificirani kot pozitivni na testih za COVID-19 (PCR in/ali test lateralnega pretoka krvi), so se vse okužbe pojavile v 3 mesecih po odvzemu krvi.Primerjave so bile narejene z uporabo dvostranskega Mann-Whitneyjevega testa.Podatki so prikazani kot grafikoni (sredinska črta na mediani, zgornja meja na 75. percentilu, spodnja meja na 25. percentilu) z brki na najnižji in največji vrednosti.Vsaka pika predstavlja darovalca.ns ni pomemben.Toplotni zemljevid f prikazuje korelacije Spearmanovega ranga med spremenljivkami za podani nabor podatkov.Primerjave, ki niso bile statistično značilne, so bile izključene iz matrike in označene s praznimi celicami.Neobdelani podatki so na voljo v obliki neobdelanih podatkovnih datotek.
Ko prehajamo v naslednjo fazo pandemije COVID-19, se bo fokus premaknil s preprečevanja na individualno obvladovanje tveganja in prepoznavanje ranljivih članov družbe.Vzpostavitev korelatov imunosti na COVID-19 je ključnega pomena za učinkovito prepoznavanje in zdravljenje teh skupin z visokim tveganjem.Zdaj je vse več dokazov, da T-celična imunost ščiti pred okužbo s SARS-CoV-2 in omejuje resnost COVID-1910.Podatki, predstavljeni tukaj, kažejo, da skupna moč za SARS-CoV-2 specifičnih T-celičnih odzivov IFN-γ+ proti koničastim, membranskim in nukleokapsidnim strukturnim proteinom zagotavlja večjo zaščito pred COVID-19 kot vezava protiteles.19 spodbuja ali nevtralizira odzive .in ga je treba upoštevati pri ocenjevanju imunosti posameznika in/ali črede.Virusi RNA, kot sta SARS-CoV-2 ali virus influence A (IAV), se izognejo serološki nevtralizaciji s hitrim razvojem izpostavljenih epitopov B-celic na površinskih antigenih, ki jih prepoznajo protitelesa.Zaščitni imunski odziv, ki ga zagotavljajo celice T, lahko odraža ciljanje epitopov iz bolj ohranjenih regij virusnih proteinov, ki ne morejo hitro ubežati imunskemu odzivu.Zaščita pred novimi različicami SARS-CoV-2, posredovana s T-celicami, je podobna heterosubtipski zaščiti, posredovani s ciljanjem T-celic na ohranjene intrinzične proteine, opažene pri podtipih IAV22,23.
Kljub ogromnemu potencialu za merjenje celičnega imunskega odziva na COVID-19 je bilo razmeroma malo pozornosti namenjene razvoju natančnih, visoko zmogljivih, standardiziranih testov T-celic.Tradicionalne zapletenosti in stroški, povezani z merjenjem odzivov T-celic, onemogočajo natančno določitev T-celične imunosti pri presejanju imunosti velike populacije.Čeprav je nedavno na voljo več komercialnih testov za stimulacijo peptidov s polno krvjo, trenutno vsi potrebujejo flebotomista za pridobivanje krvi, kar omejuje razpoložljivost in obseg.Sistemi kapilarne krvi se pogosto uporabljajo za določanje razširjenosti protiteles SARS-CoV-2 v populaciji.Prilagodili smo teste kapilarne krvi za izvajanje testov stimulacije peptidov v polni krvi za oceno reaktivnosti celic T na strukturne proteine ​​SARS-CoV-2 in specifične odzive protiteles SARS-CoV-2.Pravzaprav je kombinirano merjenje protiteles, specifičnih za SARS-CoV-2, in celic T v istem vzorcu kapilarne krvi zelo privlačno: (i) zmanjša potrebo po večkratnih krvnih preiskavah na udeleženca, (ii) izboljša izkušnjo in razumevanje udeležencev;(iii) izboljšati logistiko in zmanjšati podvajanje, (iv) zmanjšati vpliv na okolje, saj je potrebnih manj laboratorijskega potrošnega materiala in dostave vzorcev.Čeprav je bila splošna reaktivnost IFN-γ podobna med ujemajočimi se vzorci venske in kapilarne krvi, so opazili, da je nižja v kohorti kapilarne krvi udeležencev (slika 4a) v primerjavi s kohorto venske krvi (slika 2a).Vrednosti IFN-γ Obstaja več razlag za to ugotovitev, in sicer je bilo veliko število udeležencev s spremljajočimi boleznimi, ki so zahtevale imunosupresivno terapijo, vključenih v kohorto za vzorčenje kapilarne krvi (tabela 1) in sposobnost preživetja in/ali delovanje celic T, pridobljenih iz žilnih vzorcev je lahko malo, zlasti ob upoštevanju pogojev dolgoročnega shranjevanja vzorcev pred stimulacijo s peptidi.
Trenutno široko dostopno cepivo proti COVID-19 zagotavlja najboljšo zaščito pred hudo boleznijo za večino prejemnikov v 6 mesecih po cepljenju8.Spodbudno je, da kljub slabi s cepivom povzročeni serološki nevtralizaciji različic SARS-CoV-26,7 odzivi T-celic, izzvani s cepljenjem proti divjemu tipu SARS-CoV-2, ostajajo zelo reaktivni, saj se je pojavilo 25 drugih.Podatki, ki jih predstavljamo tukaj, kažejo na pomen širše ocene imunogenosti cepiva, pri čemer poudarjajo cepiva z nezadostno T-celično imunostjo za preprečitev nenadne okužbe in trajnega prenosa virusa.Opazili smo tudi, da je veliko necepljenih posameznikov, vključenih v kapilarno kohorto, imelo pomemben odziv celic T, specifičnih za SARS-CoV-2 (in IgG, ki veže N), ne glede na predhodno cepljenje, kar je verjetno posledica prejšnje okužbe.Namesto cepljenja ustreznih posameznikov je treba njihovo tveganje za okužbo oceniti na podlagi njihovega trenutnega imunskega statusa in odločitev, sprejetih na podlagi informacij.
Omejitve te študije vključujejo zagotovilo, da so udeleženci sami prijavili okužbo s SARS-CoV-2 po odvzemu krvi za določitev pomembnosti imunosti;nekateri udeleženci imajo morda asimptomatsko okužbo in ne morejo opraviti PCR in/ali testiranja bočnega toka na COVID-19.Tudi v našem naboru podatkov ni bilo podatkov o zdravilih udeležencev v času vzorčenja krvi.Poleg tega glede na to, da so vsi naši udeleženci poročali le o blagih/zmernih simptomih ali brez simptomov, iz našega nabora podatkov ni bilo mogoče identificirati imunskih odzivov, ki so napovedovali povečano tveganje za hudo bolezen in hospitalizacijo zaradi COVID-19.Vendar pa je bila prisotnost odzivov celic CD8+ T proti epitopom, specifičnim za nukleokapside, nedavno povezana z zaščito pred hudim virusom COVID-1926.Poleg tega tukaj uporabljeni test ni meril odzivov celic T na specifične zgodnje izražene nestrukturne proteine ​​SARS-CoV-2, za katere je bilo pred kratkim dokazano, da se prednostno kopičijo pri seronegativnih zdravstvenih delavcih, ki so bili v stiku z okuženimi bolniki.Na podlagi tega dela, glede na razširjenost prenosa v skupnosti v času rekrutacije in visoko verjetnost kontaktne okužbe v populaciji, se zdi, da je število celic T, specifičnih za SARS-CoV-2, najdenih v naših testih, tudi sposobno odstraniti.subkliničnih okužb v naših kohortah.Nazadnje nismo izmerili proizvodnje interlevkina 2 s celicami T, ker je naše prejšnje delo pokazalo slabo identifikacijo odzivov T-celic, specifičnih za SARS-CoV-214, čeprav lahko odzivi, specifični za IL-2, kažejo na že obstoječo navzkrižno reaktivnost.celic, povezanih z obrambo pred okužbo s SARS-CoV-211.
Ti podatki skupaj poudarjajo temeljno potrebo po dolgoročnih longitudinalnih študijah, ki vključujejo T-celične odzive, specifične za SARS-CoV-2, v meritve imunosti na ravni populacije.Tem prizadevanjem lahko pomaga razvoj novega testa kapilarne krvi, ki meri odziv T-celic.
Raziskovalni projekt je zbiral udeležence od februarja 2021 do marca 2022. Kohorto zdravih darovalcev (n = 148), ki so darovali vzorce venske krvi, so sestavljali predvsem univerzitetno osebje in študenti, ki sodelujejo v presejalni službi za COVID-19 Univerze v Cardiffu, ali osebje osnovne šole v Cardiff.Vsi udeleženci so bili sicer zdravi in ​​niso poročali o jemanju nobenih imunosupresivnih zdravil (za značilnosti glejte tabelo 1).Kohorta udeležencev, ki so darovali vzorce kapilarne krvi, je vključevala vse prostovoljne darovalce (stare 18+) iz vsega Združenega kraljestva.Med 24. januarjem in 14. marcem 2022 je bilo v raziskavo vključenih 342 udeležencev, od katerih jih je 299 oddalo vzorce krvi v laboratorij.Številni udeleženci so ostali necepljeni in/ali so poročali o resnih sočasnih boleznih, vključno z avtoimunskimi boleznimi in rakom (za značilnosti glejte tabelo 1).To študijo sta prejela etično odobritev Odbora za raziskovalno etiko Newcastle and North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) in Odbora za raziskovalno etiko Medicinske fakultete Univerze v Cardiffu (SREC ref: SMREC 21/01).Vsi udeleženci so pred vključitvijo dali pisno informirano soglasje.Udeleženci za sodelovanje v tej študiji niso prejeli nobenega nadomestila.
Vzorci venske krvi so bili pridobljeni z venepunkcijo v 6 ali 10 ml litijevih ali natrijevih heparinskih vakuumskih posod (BD).Vzorci kapilarne krvi so bili pridobljeni s prstno lanceto in nato zbrani v heparinskih mikrokontejnerjih (BD).Zahteva se najmanj 400 µl krvi;vsak vzorec, manjši od te količine, bo zavrnjen.Drugi razlogi za zavrnitev vzorca so vključevali veliko koagulacijo in/ali hemolizo ter nezmožnost zbiranja viskozne plazme za analizo (dodatna slika 5).Za oceno protitelesnih odzivov je bilo na voljo skupno 299 vzorcev kapilarne krvi, od tega 270 vzorcev tudi za oceno T-celičnega odziva.
Specifični T-celični odzivi SARS-CoV-2 so bili ocenjeni s testom COVID-19 Immuno-T (ImmunoServ Ltd) in izvedeni, kot je opisano prej14.Na kratko, enemu 6 ml ali 10 ml natrijevega heparina (BD) venski vakuum je bil odvzet vsakemu udeležencu in obdelan v laboratoriju v 12 urah po odvzemu krvi.Čeprav je bila večina vzorcev obdelanih v 24 urah, je bila ena 400–600 μl heparinizirane kapilarne krvi mikrokrvavitve (BD) zbrana v 48 urah po vzorčenju prstne paličice.Vzorci venske in/ali kapilarne krvi so bili stimulirani z ločenimi peptidnimi skupinami, specifičnimi za SARS-CoV-2 (različica divjega tipa), kot je opisano prej14.Ta peptidna knjižnica vsebuje 420 15-mernih zaporedij z 11 prekrivajočimi se aminokislinami, ki zajemajo celoten spike protein (S1 in S2) (S; NCBI protein: QHD43416 1), nukleokapsidni fosfoprotein (NP; NCBI protein: QHD43423 2) in membranski glikoprotein (M ; NCBI protein: QHD43419 1) kodirne sekvence (imenovane "S-/NP-/M-kombinatorna peptidna knjižnica").Vse peptide smo očistili do >70 %, raztopili v sterilni vodi in uporabili pri končni koncentraciji 0,5 μg/ml na peptid.Vzorci so bili inkubirani pri 37 °C 20-24 ur.Epruvete smo nato centrifugirali pri 5000 × g 3 minute in z vrha vsakega krvnega vzorca zbrali ~150 µl plazme.Pred izvajanjem testov za odkrivanje citokinov/protiteles hranite vzorce plazme pri -20 °C do enega meseca.
IFN-γ je bil izmerjen z uporabo IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, kataloška številka 430116) in izveden v skladu z navodili proizvajalca.Takoj po dodajanju zaustavitvene raztopine (2N H2SO4) smo mikroploščo prebrali pri 450 nm z uporabo bralnika plošč BioLegend Mini ELISA.IFN-γ je bil kvantificiran z ekstrapolacijo standardne krivulje z uporabo GraphPad Prism.Vrednosti pod spodnjo mejo detekcije testa so bile zabeležene kot 7,8 pg/ml, vrednosti nad zgornjo mejo detekcije testa pa kot 1000 pg/ml.
Protitelesa IgG proti SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N so bila izmerjena s ploščo Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex (Bio-Rad, kat. št. 12014634) in označena v skladu z navodila proizvajalca.navodila.Vzorci, ki so poročali o vrednostih nad mejo kvantifikacije, so bili ponovno analizirani pri razredčitvi 1:1000.Povprečno intenzivnost fluorescence kroglic smo izmerili na instrumentu Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Koncentracije protiteles so bile izračunane z enojno kontrolno analizo VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) in pretvorjene v mednarodne referenčne standardne enote WHO/NIBSC 20/136 (BAU/mL) z uporabo faktorja umerjanja proizvajalca.
RBD in S1 specifična nevtralizirajoča protitelesa proti divjemu tipu SARS-CoV-2 in delta (B.1.617) linijam SARS-CoV-2 so bila izmerjena z Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Kit Kit (Bio -Rad , kataloška št. 12016897), po navodilih proizvajalca.Izmerite povprečno intenzivnost fluorescence na Bio-Plex 200 (Bio-Rad) in izračunajte odstotek inhibicije (tj. nevtralizacije) z uporabo naslednje formule:
Infektivni nevtralizacijski testi za SARS-CoV-2 so bili izvedeni, kot je opisano prej28.Na kratko, 600 PFU divjega tipa SARS-CoV-2 smo inkubirali s 3-kratnimi serijskimi razredčinami plazme v dvojniku 1 uro pri 37 °C.Zmes smo nato dodali celicam VeroE6 za 48 ur.Enoplasti so bili fiksirani s 4% paraformaldehidom, permeabilizirani z 0,5% NP-40 in inkubirani 1 uro v blokirnem pufru (PBS, ki vsebuje 0,1% tween in 3% posnetega mleka).Primarno protitelo (anti-nukleokapsid 1C7, Stratech) smo dodali blokirnemu pufru za 1 uro pri sobni temperaturi.Po izpiranju smo blokirnemu pufru za 1 uro dodali sekundarno protitelo (proti-mišji IgG-HRP, Pierce).Enosloji so bili oprani, razviti z uporabo Sigmafast OPD in odčitani na bralniku plošč Clariostar Omega.Vdolbinice brez virusa, brez virusa, vendar brez protiteles, in normalizirani serumi, ki kažejo vmesno aktivnost, so bili vključeni v vsak poskus kot kontrole.
Statistična analiza je bila izvedena v GraphPad Prism (različica 9.4.1).Normalnost nabora podatkov je bila testirana s testom Shapiro-Wilk.Za vse primerjave so bili uporabljeni neparametrični kriteriji.Za neparne vzorce je bil uporabljen Mann-Whitneyjev test.Vsi testi so bili dvostranski z nominalnim pragom pomembnosti P ≤ 0,05.
Začetna raziskovalna analiza nabora podatkov je bila narejena v R (različica 4.0.3).To vključuje razvoj Spearmanove univariatne rang korelacijske matrike, kjer je korelacija med dvema spremenljivkama predstavljena z velikostjo in barvo kvadratov.Statistična pomembnost med povezavami je bila izračunana z uporabo Spearmanovega rho, kjer so vrednosti ≤0,05 veljale za pomembne.Primerjave, ki niso bile statistično značilne, so bile izključene iz matrike in označene s praznimi celicami.P-vrednosti so bile prilagojene za več primerjav z uporabo Holmove korekcije.Za simulacijo učinka spremenljivk v naboru podatkov na pozitiven odziv na COVID-19 je bil uporabljen binarni logistični regresijski model.Odzivi T celic IFN-γ in rezultati titra anti-RBD/S1/S2/N IgG so bili pretvorjeni v faktorje, kjer je bil vsak posameznik dodeljen ustreznemu kvartilu za vsako oceno.Po tem je bil razvit začetni raziskovalni model z uporabo funkcije glm v statističnem paketu (V4.0.3).Razmerja obetov, izpeljana iz tega izvirnega modela, so bila pridobljena iz koeficientov modela z uporabo funkcije 'odds_plot' v paketu OddsPlotty (V1.0.2).Pri razvoju modela navzkrižne validacije smo uporabili funkcijo »bestglm« iz paketa bestglm (V0.37.3), da bi omejili pristranskost uporabnikov in zagotovili, da je mogoče izbrati najboljšo podmnožico napovedovalcev.Izbrana metoda je bila "izčrpna" in informacijski kriterij, uporabljen za oceno primernosti modela, je bil AIC.Isti potek dela, opisan zgoraj, je bil uporabljen za pridobitev razmerja obetov.
Za več informacij o zasnovi študije glejte povzetek študije Nature, povezan s tem člankom.
Pisma in zahteve za gradivo je treba nasloviti na dr. Martina Scarra ali profesorja Andrewa Godkina.Ta članek vsebuje izvirne podatke.
Koda R, ki se uporablja za izdelavo statističnih modelov, je javno dostopna brez zahteve29.Informacije o ponatisu in licence najdete na www.nature.com/reprints.
Munro, APS et al.Varnost in imunogenost sedmih cepiv proti COVID-19 kot tretjega odmerka (oživitvenega) po dveh odmerkih ChAdOx1 nCov-19 ali BNT162b2 (COV-BOOST) v Združenem kraljestvu: slepo, multicentrično, randomizirano, kontrolirano preskušanje 2. faze.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV et al.Imunogenost, varnost in reaktogenost heterolognega primarnega cepljenja proti COVID-19 (Com-COV2) z uporabo mRNA, virusnih vektorjev in proteinskih adjuvantnih cepiv v Združenem kraljestvu: faza 2, enojno slepo, randomizirano preskušanje, test neinferiornosti.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB et al.Učinkovitost cepiv proti COVID-19 pri bolnikih z oslabljenim imunskim sistemom: sistematični pregled in metaanaliza.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Zmanjšana nevtralizacija SARS-CoV-2 mikronske različice B.1.1.529 s serumom po imunizaciji.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y in Baliser RD Prebojna okužba pri posameznikih, cepljenih s SARS-CoV-2: merjenje, vzroki in posledice.Nacionalni duhovnik za imunologijo.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG et al.Oslabljen humoralni imunski odziv na cepivo BNT162b2 Covid-19 za 6 mesecev.N. inž.J. Medicina.385, e84 (2021).
Carreño, JM et al.Aktivnost rekonvalescentov in serumov cepiva proti SARS-CoV-2 Omicron.Nature 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. et al.Trajanje zaščite katarskega cepiva mRNA proti podrazličicama SARS-CoV-2 Omicron BA.1 in BA.2.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ et al.Frekvenca spominskih celic B se zmanjša s prebojno okužbo s cepivom delta COVID-19.Molekularna medicina EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. et al.Navzkrižno reaktivne spominske celice T so povezane z zaščito kontaktov s COVID-19 pred okužbo s SARS-CoV-2.Narodna komuna.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH et al.Izraziti odzivi T-celic in B-celic, reaktivnih na SARS CoV-2 omikron, pri prejemnikih cepiva proti COVID-19.znanost.Imunologija.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu et al.Podedovane celice T, specifične za SARS-CoV-2, navzkrižno prepoznajo različice omikrona.Narodna medicina.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ et al.Merjenje celic T, specifičnih za SARS-CoV-2, iz polne krvi razkrije asimptomatsko okužbo in imunogenost cepiva pri zdravih posameznikih in bolnikih z rakom solidnih organov Imunologija https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT et al.Hitro merjenje T-celic SARS-CoV-2 v polni krvi cepljenih in naravno okuženih posameznikov.J. Klinični.investirati.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU et al.Odziv na cepivo proti COVID-19 pri bolnikih z multiplo sklerozo.namestite.Nevroni.91, 89–100 (2022).
Bradley RE et al.Vztrajna okužba s COVID-19 z Wiskott-Aldrichovim sindromom je izginila po terapevtskem cepljenju: prikaz primera.J. Klinični.Imunologija.42, 32–35 (2022).